為了得到更好的實(shí)驗(yàn)成果,一些ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)新手們還需多加了解技術(shù)內(nèi)容,公司每周都會(huì)為您精心整理出要點(diǎn)技術(shù)方法,能夠熟練的把握好這些之后再應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)里面就會(huì)簡(jiǎn)略的多.今日的主要內(nèi)容是入了ELISA的門,這些技術(shù)點(diǎn)你得知道.
樣本加樣方法
1 .細(xì)胞上清：前處理有必要是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100μl即可.假設(shè)濃度太高需稀釋時(shí),用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋.
2 .腦脊液：前處理有必要是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100μl即可.假設(shè)濃度太高需稀釋時(shí),用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋.
3 .血清血漿：請(qǐng)參與50ul樣本剖析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大,請(qǐng)將樣本與樣本剖析緩沖液等量參與,缺乏部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液彌補(bǔ)至100ul.
A.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝結(jié)后,取上清,ELISA試劑盒避免在冰箱中凝結(jié)血液；
B.血漿標(biāo)本,舉薦用EDTA的方法收集若待測(cè)樣本不能及時(shí)檢測(cè),標(biāo)本收集后請(qǐng)分裝,凍存于－20℃,避免重復(fù)凍融.
C.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標(biāo)本應(yīng)明澈透明,檢測(cè)前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過(guò)離心去除.
E.請(qǐng)勿使用溶血,高血脂或污染的標(biāo)本檢測(cè),否則成果將不準(zhǔn)確.
4 組織勻漿液的樣本,要制備過(guò)程中需要在緩沖液中參與蛋白酶抑制劑,避免蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解,構(gòu)成檢測(cè)成果的值偏低.
因組織勻漿液的樣本蛋白品種多,含量豐厚,實(shí)驗(yàn)參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進(jìn)行,否則就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)成果.具體是參與50ul樣本剖析緩沖液后加50ul標(biāo)本,需稀釋時(shí),ELISA試劑盒請(qǐng)將樣本與樣本剖析緩沖液等量參與,缺乏部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液彌補(bǔ)至100ul.
由于政策蛋白不同,或許構(gòu)成降解的蛋白類型或許不一樣,假設(shè)實(shí)驗(yàn)前通過(guò)文獻(xiàn)確定用哪種蛋白酶抑制劑,有針對(duì)性參與,可節(jié)約抑制劑.假設(shè)查不到相關(guān)文獻(xiàn),可采用組合抑制的方法確保蛋白不易被降解.
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