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ELISA檢測試劑盒的特異抗體或抗原*結(jié)合
更新時間:2015-05-19   點擊次數(shù):993次

    在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA檢測試劑盒測定中試劑的準備zui為關(guān)鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。

    這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量。此外,當試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。溫育是ELISA檢測試劑盒測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。

    zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,ELISA檢測試劑盒很容易出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

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