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ELSIA試劑盒的操作步驟復(fù)雜
更新時間:2016-08-15   點(diǎn)擊次數(shù):1273次

  這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在 ELSIA試劑盒中,正常人血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。

a.陽性判定值

陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。

  用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測 HBsAg的試劑盒為例。ELSIA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,目視法簡捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計(jì)算陰性對照A值的平均數(shù)(NC X )和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計(jì)算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效。

  與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,但在計(jì)算公式中引入陽性對照 A值,現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿,陽性對照中抗HBc含量為125±1 00u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計(jì)算陰性對照A值的平均值(NC X )和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),ELSIA試劑盒兩個平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000,而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個陰性對照重新計(jì)算×NCX;如有2個陰性對照A超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性,A>陽性判定值的反應(yīng)為陰性。

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